Quy trình định lượng đồng thời acid Eicosapentaenoic (EPA) và acid Docosahexaenoic (DHA) trong thực phẩm bảo vệ sức khỏe dạng dầu bằng sắc ký khí ghép nối khối phổ (GC-MS) đã được phát triển và thẩm định. Các điều kiện phân tích và xử lý mẫu được tối ưu hóa, trong đó lựa chọn sử dụng cột DB-5MS cho phân tích sắc ký, mẫu thực được chiết lặp lại 3 lần và dẫn xuất hóa bằng 5 mL dung dịch CH₃ONa/MeOH 5%. Phương pháp tuyến tính trong khoảng 10-1000 mg/L đối với cả EPA và DHA (R² = 0,9999). Giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) lần lượt đạt 10 mg/kg và 30 mg/kg. Độ lệch chuẩn tương đối (RSD) < 3,0%, RSD của độ chính xác trung gian nhỏ hơn 4,5% , và độ thu hồi đạt 95,05-104,87%, đáp ứng được yêu cầu của AOAC. Phương pháp được áp dụng thử nghiệm trên năm mẫu thực phẩm bảo vệ sức khỏe thương mại dạng dầu, kết quả so sánh cho thấy hàm lượng EPA và DHA phân tích chênh lệch không nhiều so với giá trị công bố trên nhãn.